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60108-701美國(guó)賽默飛熱電HyperSep C18 小柱
使用 SPE 樣品制備技術(shù)可極大提高多種生物學(xué)、制藥、法醫(yī)學(xué)和環(huán)境應(yīng)用的穩(wěn)健性和可靠性。Thermo Scientific HyperSep C18 小柱的特點(diǎn)是擁有用于非極性至中度極性化合物的高保留率的烷基鍵合相。 該疏水反相填料可保留大多數(shù)非極性化合物和水性基質(zhì)中的大多數(shù)有機(jī)分析物。
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.測(cè)定多肽,一般采用什么柱子?流動(dòng)相是乙腈和水,還有微量的TFA。特別是像類(lèi)似三肽的短肽,應(yīng)該怎么選擇柱子?
答:分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測(cè)定,也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。
5.氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí),很傷柱子,如使用一段時(shí)間后,柱效降低,峰形改變,如何恢復(fù)?
答:氨基柱測(cè)酸性樣品,應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類(lèi)的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議:用5~10倍的柱體積的含0.5~1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后,再進(jìn)行分析這類(lèi)酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如,0.1%。
6.色譜柱的技術(shù)都有哪些?比如,封尾等,這些技術(shù)在應(yīng)用時(shí)都體現(xiàn)在哪里?
答:色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),填料技術(shù)自不待言,填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒(méi)有想象中的這么簡(jiǎn)單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長(zhǎng)度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床,更多是一門(mén)藝術(shù),需要經(jīng)驗(yàn)積累。
國(guó)內(nèi)和國(guó)外想比,我認(rèn)為色譜柱的差距在于:國(guó)內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開(kāi)發(fā)填料,一般買(mǎi)國(guó)外現(xiàn)成填料裝柱,買(mǎi)到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。另外因?yàn)檠b柱歷史短,經(jīng)驗(yàn)積累少,裝柱工藝也沒(méi)有*達(dá)到國(guó)外水平。另外,對(duì)色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料——裸硅膠,國(guó)產(chǎn)的還不過(guò)關(guān),在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國(guó)外產(chǎn)品相比,差距很大。
7.色譜柱技術(shù)的差距在哪里?
答:色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),填料技術(shù)自不待言,填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒(méi)有想象中的這么簡(jiǎn)單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長(zhǎng)度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床,更多是一門(mén)藝術(shù),需要經(jīng)驗(yàn)積累。
國(guó)內(nèi)和國(guó)外想比,我認(rèn)為色譜柱的差距在于:國(guó)內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開(kāi)發(fā)填料,一般買(mǎi)國(guó)外現(xiàn)成填料裝柱,買(mǎi)到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。另外,因?yàn)椋b柱歷史短,經(jīng)驗(yàn)積累少,裝柱工藝也沒(méi)有*達(dá)到國(guó)外水平。另外,對(duì)色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料——裸硅膠,國(guó)產(chǎn)的還不過(guò)關(guān),在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國(guó)外產(chǎn)品相比,差距很大。
8.柱子在什么情況下可以清洗一下篩板呢?原來(lái)也討論過(guò)這個(gè)問(wèn)題,我也拆下來(lái)清洗過(guò),但我看到柱前段的污染更甚,于是就用刀片刮了刮,然后把清洗好的篩板安裝上去。問(wèn)題解決了,但使用壽命會(huì)不會(huì)減少呢?
答:柱頭污染了,就取出污染的,再裝一些填料。因?yàn)椋尤肽愎瘟诵┨盍希敲次⒂^的塔板數(shù)就少了。假入你刮得不多,僅表面,可能就是一些臟物,所以,問(wèn)題解決,但是,今后還會(huì)有同樣問(wèn)題,再掛,那么不小心刮,影響柱效。建議還是裝一個(gè)預(yù)柱。
9.如果柱子取下來(lái)放置一段時(shí)間,需要做什么保護(hù)嗎?
答:對(duì)一般的反相柱,也就是洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,然后用堵頭塞緊柱兩頭,以免保存溶劑揮發(fā),應(yīng)該不需要做特殊的保護(hù)。
10.流動(dòng)相中加入適量的si氫fu喃可以改善峰形的機(jī)理是什么?
答:《高效液相色譜方法及應(yīng)用》于世林編著的上面說(shuō):甲醇為質(zhì)子給予體、乙腈為質(zhì)子接受體、si氫fu喃是偶極溶劑,應(yīng)該除了極性影響,還有另外的影響因素,至于分離機(jī)理,還是比較復(fù)雜的,不能看成是個(gè)萬(wàn)能方法。
11.關(guān)于色譜柱的填裝問(wèn)題!我個(gè)人認(rèn)為現(xiàn)在色譜柱的填裝一般有3種情況:
①?lài)?guó)外生產(chǎn)填料并填裝完成成品賣(mài)到國(guó)內(nèi);
②國(guó)外生產(chǎn)填料,國(guó)內(nèi)填裝銷(xiāo)售;
③國(guó)內(nèi)生產(chǎn)填料,國(guó)內(nèi)填裝銷(xiāo)售。
一般情況下,第1種情況賣(mài)的貴,也質(zhì)量!可是我就不明白了:如果是填料的生產(chǎn)很復(fù)雜的話,那么填裝上國(guó)內(nèi)也跟不上去嗎?為什么換在國(guó)內(nèi)填裝就會(huì)出現(xiàn)或多或少的一些小問(wèn)題呢?
答:國(guó)內(nèi)填裝會(huì)出現(xiàn)質(zhì)量小問(wèn)題,和國(guó)內(nèi)目前普遍做事沒(méi)有國(guó)外嚴(yán)謹(jǐn)有關(guān)吧。如果工藝技術(shù)上沒(méi)有問(wèn)題,又能制訂并切實(shí)執(zhí)行一整套嚴(yán)格的生產(chǎn)質(zhì)量管理措施,國(guó)內(nèi)填裝和國(guó)外填裝并無(wú)區(qū)別。