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作為實驗室常見的分析手段之一，高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”等。由高效液相色譜原理設計而成的機器，即我們在做分析實驗中經常使用的高效液相色譜儀。HPLC主要用于分析高沸點不易揮發的、受熱不穩定的和分子量大的有機化合物等。
HPLC的檢測流程和原理：在檢測系統中，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由于不同的分配系數，經過反復多次的“吸附-解吸”的分配過程，樣品溶液中組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣本濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，終數據以圖譜形式輸出。
在樣品溶液中，不可避免的會有雜質，這時候就要引進“相對響應因子”和“相對校正因子”的概念。
相對響應因子(RRF)一般應用于原料藥或者藥物制劑色譜分析方法中，對有關物質(如雜質或者降解雜質)的精確定量或者活性藥物原料(API)的純度檢查。作為重要的色譜方法學參數，RRF的值取決于化合物本身的紫外吸收光譜性質以及檢測器波長，準確的RRF值對相關物質/雜質研究非常重要。
相對校正因子的計算方法為：
F=(A雜/C雜)/(A樣/C樣)
在中國藥典中，“加校正因子的主成分自身對照法”規定計算方法為：
色譜圖上各雜質的峰面積，分別乘以相應的校正因子后與對照溶液主成分的峰面積比較，計算各雜質含量。這里規定的“校正因子”計算方法是按內標法校正因子：
F=(A內標/C內標)/(A對照/C對照)
相對響應因子(RRF)與校正因子F的關系如下：
F=1/RRF= Slope 主峰/ Slope imp
其中：Slope imp是指對應雜質的斜率，Slope 主峰是指主峰的斜率。
需要注意的是，相對響應因子的數值不是一成不變的，一種物質在某種特定條件下，它的相對響應因子是針對自身而言的，如果條件改變，則響應因子數值也有可能改變。
在使用HPLC時，應當考慮相對相應因子的影響，以免對數值造成誤差過大。
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