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流式細胞儀的使用注意事項

2022年07月14日 13:36

　　流式細胞儀是對細胞進行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量，并可以根據預選的參量范圍把想要的細胞亞群從中分選出來。

　　流式細胞儀主要由流動室和液流系統、激光源和光學系統、光電管和檢測系統、計算機和分析系統四個部分組成，要想很好地應用流式細胞分析和分選技術，必需先對儀器進行調試，使其處于良好的工作狀態，并能正確使用儀器。下面簡要介紹流式細胞儀的調試項目及要點、使用的程序等等。

　　調試和校準

　　1、激光強度：除調整反射鏡的角度以調整到所需波長的激光出光外，還要結合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為最大。

　　2、液流速度：可通過操作臺數字顯示監督，調節　氣體壓力大小以獲得穩定的液流速度。

　　3、測量區光路調節　：這是調試工作的關鍵。需要保證在測量區的液流、激光束、90散射測量光電系統垂直正交，而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。

　　儀器的操作和使用

　　1、打開電源，對系統進行預熱；

　　2、打開氣體閾，調節　壓力，獲得適宜的液流速度；開啟光源冷卻系統；

　　3、在樣品管中加入去離子水，沖洗液流的噴嘴系統；

　　4、利用校準標準樣品，調整儀器，使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調定的基礎上，0和90散射的熒光強度*，并要求變異系數為最小；

　　5、選定流速、測量細胞數、測量參數等，在同樣的工作條件下測量樣品和對照樣品；同時選擇計算機屏上數據的顯示方式，從而能直觀掌握測量進程；

　　6、樣品測量完畢后，再用去離子水沖洗液流系統；

　　7、因為實驗數據已存入計算機硬盤(有的機器還備有光盤系統，存貯量更大)，因此可關閉氣體、測量裝置，而單獨使用計算機進行數據處理；

　　8、將所需結果打印出來。

　　操作和使用中的注意事項

　　1、光電倍增管要求穩定的工作條件，暴露的較強的光線下以后，需要較長時間的“暗適應”以消除或降低部分暗電流本底才能工作；另外還要注意磁屏蔽；

　　2、光源不得在短時間內(一般要1h左右)關上又打開；使用光源必須預熱并注意冷卻系統工作是否正常；

　　3、液流系統必需隨時保持液流暢通，避免氣泡栓塞，所使用的鞘流液使用前要經過過濾、消毒；

　　4、注意根據測量對象的變換選用合適的濾片系統、放大器的類型等；

　　5、特別強調每次測量都需要對照組。

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