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適用范圍：本方法適用于BOD5或等于2mg/L并且不超過6000mg/L的水樣。BOD5大于6000mg/L的水樣仍可用本方法，但由于稀釋會造成誤差，有必要要求對測定結果做慎重的說明。本試驗得到的結果是生物化學和化學作用共同產生的結果，它們不象單一的、有明確定義的化學過程那樣具有嚴格和明確的特性，但是它能提供用于評價各種水樣質量的指標。本試驗的結果可能會被水中存在的某些物質所干擾，那些對微生物有毒的物質，如殺菌劑、有毒金屬或游離氯等，會抑制生化作用。水中的藻類或硝化微生物也可能造成虛假的偏高結果。

原理：將水樣注滿培養瓶，塞好后應不透氣，將瓶置于恒溫條件下培養5天。培養前后分別測定溶解氧濃度，由兩者的差值可算出每升水消耗掉氧的質量，即BOD5值。由于多數水樣中含有較多的需氧物質，其需氧量往往超過水中可利用的溶解氧（DO）量，因此在培養前需對水樣進行稀釋，使培養后剩余的溶解氧（DO）符合規定。一般水質檢驗所測BOD5只包括含碳物質的耗氧量和無機還原性物質的耗氧量。有時需要分別測定含碳物質耗氧量和硝化作用的耗氧量。常用的區別含碳和氮的硝化耗氧的方法是向培養瓶中投加硝化抑制劑，加入適量硝化抑制劑后，所測出的耗氧量既為含碳物質的耗氧量。在5天培養時間內，硝化作用的耗氧量取決于是否存在足夠數量的能進行此種氧化作用的微生物，原污水或初級處理的出水中這種微生物的數量不足，不能氧化顯著量的還原性氮，而許多二級生化處理的出水和受污染較久的水體中，往往含有大量硝化微生物，因此測定這種水樣時應抑制其硝化反應。在測定BOD5的同時，需要葡萄糖溶液完成驗證試驗。

操作步驟

1樣品預處理

1.1樣品的中和

如果樣品的pH不在6-8之間，先做單獨試驗，確定需要用的鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液的體積，再稱樣品，不管有無沉淀形成。

1.2含游離氯或結合氯的樣品

加入所需體積的氫氧化鈉溶液，使樣品中自由氯和結合氯失效，注意避免過量。

2試驗水樣的準備

將試驗樣品溫度升至約20°C，然后再半充滿的容器內搖動樣品，以便消除可能存在的過飽和氧。

將已知體積樣品置于稀釋容器中，用稀釋水或接種稀釋水稀釋，輕輕地中和，避免夾雜空氣泡。