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1、柜內放置的儀器和材料保持在低數量。靜壓箱后部的空氣循環不得受阻。將材料放入安全柜的工作區之前，應對其表面進行去污處理。
2、操作手后方的活動要達到少。
3、柜內不得使用本生燈(一種煤氣燈)，因其產生的熱會干擾氣流并可能損壞過濾器。可以使用微型電焚燒爐，但使用一次性滅菌環則好。
4、要根據標準和有關的規定，向所有可能使用生物安全柜的用戶解釋安全柜的使用及限制條件。應發給工作人員書面規定或安全手冊或操作手冊。是明確告訴工作人員，在出現濺灑、破碎、方法不當的情況下，安全柜無法保護操作人員。
5、前送風格柵不得被便簽、滴管、或其他材料堵住，否則會干擾氣流從而可能使材料受到污染，使人員處在暴露狀態。
6、應在每次工作完成后及一天結束時，使用合適的消毒劑清潔安全柜的表面。
7、柜子的風扇在工作開始前和工作完成后要再各運行5分鐘。
8、安全柜只有在工作正常時才能使用。
9、安全柜前臉的玻璃觀察窗不得在安全柜處使用狀態時打開。
10、柜內所有的工作要在工作面的中部或后部進行，并能從觀察面板中看到。
11、操作手不應將手臂來回伸進出柜子，以免干擾氣流。